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假陽性結(jié)果的特征 

    假陽性結(jié)果是樣品中沒有待檢測(cè)物時(shí)在檢測(cè)帶上出現(xiàn)了一條彩線（對(duì)于金標(biāo)而言是紅線）。這條線可能在檢測(cè)的初期或在一段明顯的時(shí)間延遲之后出現(xiàn)。假信號(hào)可能在許多種樣品中發(fā)生，也可能僅僅發(fā)生在一種特定類型或來源的樣品中。 

假陽性產(chǎn)生的基本原因

   在蛋白與膠體金顆粒特異性結(jié)合時(shí)，在此過程進(jìn)行期間，蛋白質(zhì)被三種主要的力吸收在膠體金的表面上。

1.電荷引力：膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，這是由于在將氯金化鈉轉(zhuǎn)化為膠體金時(shí)，使用的還原劑（經(jīng)常是檸檬酸鹽）帶有的一層負(fù)電荷被吸附在膠體金顆粒的表面。負(fù)電荷將吸引帶有正電荷的蛋白并且足以使其靠近結(jié)合區(qū)的表面，這樣就有可能發(fā)生假陽性。低于等電點(diǎn)的蛋白帶有正電荷，因此可能會(huì)與膠體金顆粒表面發(fā)生強(qiáng)烈的吸引作用。尤其是帶有富含賴氨酸和精氨酸的蛋白區(qū)域在低于賴氨酸的等電（pH10.4）和精氨酸的等電點(diǎn)（pH12.5）時(shí)會(huì)帶有大量的正電荷。 

2.疏水作用力：一旦蛋白質(zhì)彼此十分接近（之間的距離大約小于1nm），蛋白質(zhì)的任何疏水區(qū)很有可能與膠體金表面的疏水區(qū)接觸并且與之結(jié)合。因此富含非極性氨基酸（例如色氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸或苯丙氨酸）的蛋白質(zhì)會(huì)與膠體金表面發(fā)生強(qiáng)結(jié)合作用。

3.配位鍵結(jié)合力  配位鍵結(jié)合力是所有吸引力中最強(qiáng)的結(jié)合力。含有大量富含硫的氨基酸（由于存在半胱氨酸和甲硫氨酸）的蛋白質(zhì)強(qiáng)結(jié)合膠體金顆粒表面。這是由于在金原子（具有傳導(dǎo)帶電子的能力）和硫原子（帶有價(jià)電子）之間的吸引力造成的。當(dāng)這三種結(jié)合力作用于金標(biāo)顆粒上，它們會(huì)產(chǎn)生如下所述的假陽性信號(hào)并且由此而對(duì)檢測(cè)技術(shù)的效能產(chǎn)生不良的影響。

由于金標(biāo)粒子而產(chǎn)生的問題 

    由于某種原因金標(biāo)粒子的表面由于沒有被蛋白質(zhì)覆蓋而會(huì)部分裸露。在干燥金標(biāo)液或者在檢測(cè)過程中，或者在第一步中金標(biāo)被涂得很少，這些都有可能導(dǎo)致抗體被去除。無論哪種原因，裸露的膠體金顆粒將會(huì)被任何帶有正電荷的蛋白質(zhì)或硝化纖維素或尼龍膜所吸引。當(dāng)膠體金顆粒通過捕捉線，由于距離非常小而物理接觸的可能性的非常大，這特別明顯。因此有效地包被膠體金顆粒并且蛋白質(zhì)在儲(chǔ)存、處理或操作的過程中沒有脫落，這兩點(diǎn)是非常重要的。

    除了膠體金顆粒對(duì)捕捉線的吸附外，標(biāo)記抗體本身可能在特定的操作條件下被捕捉線吸附。這可能歸結(jié)于電荷或疏水作用力，也可能是由于在此過程中的酸性或離子環(huán)境。 過量的金標(biāo)粒子會(huì)產(chǎn)生幾個(gè)問題。首先，它能夠提高在捕捉線上假陽性信號(hào)的可能性，或則是由于大量的金標(biāo)液通過這條線。其次，在檢測(cè)期后，它也會(huì)提高膠體金標(biāo)粒子回流的可能性。膠體金顆粒也可能聚集成簇，一般來說有很多原因，通常是由于操作失誤所致。膠體金簇如果多的話可能會(huì)堵塞膜孔。如果成簇的原因是由于膠體金的疏水作用力形成的，那么在金標(biāo)液流動(dòng)的過程中膠體金顆粒也會(huì)粘附在捕捉抗體上。

   無論待測(cè)物是否存在，金標(biāo)的抗體都可能會(huì)與捕捉抗體發(fā)生非特異性免疫反應(yīng)。但是這種方法會(huì)使硝酸纖維素膜上的標(biāo)記抗體與捕捉抗體非常接近，從而提高了發(fā)生非特異性免疫反應(yīng)的可能性。另外，特別是在使用多克隆抗體時(shí)，有可能會(huì)發(fā)生與樣品中其它待測(cè)物的非特異性的反應(yīng)，這種非特異性反應(yīng)的發(fā)生與否主要取決于使用的抗體的純度。 

與固相支持物相關(guān)的問題

   硝酸纖維素膜非常脆并且在接觸時(shí)很容易受到破壞。因此在撕開膜的過程中避免與膜發(fā)生任何可能的機(jī)械接觸是非常重要的。如果應(yīng)用捕捉抗體時(shí)膜被壓制在捕捉抗體帶上，那么在樣品流動(dòng)過程中，會(huì)提高金標(biāo)粒子發(fā)生非特異性反應(yīng)的可能性。兩個(gè)方面能夠使殘余的金顆粒附著在捕捉抗體帶上——金標(biāo)粒子在膜中的流速太慢或者是膠體金墊釋放的速度太慢。如果膜的孔徑太小或者在檢測(cè)帶上沒有足夠的活性物質(zhì)，再就是硝酸纖維素膜與金標(biāo)液或與吸收墊的接觸不良，那么這些情況就會(huì)發(fā)生。

   此外，由于硝酸纖維素膜是疏水的，因此會(huì)阻礙金標(biāo)液順暢的流動(dòng)。有些樣品可能非常具有粘性的（例如血清），這種因素也會(huì)使流速減慢。當(dāng)檢測(cè)體系中沒有足夠的樣品或活性物質(zhì)來使金標(biāo)沿著檢測(cè)帶移動(dòng)時(shí)，膠體金顆粒也會(huì)粘附在捕捉抗體帶上。如果花費(fèi)很多時(shí)間來觀測(cè)檢測(cè)結(jié)果（通常是超過15分鐘）時(shí)，膜就會(huì)變干,多余的金標(biāo)粒子很有可能開始從吸收墊向干燥后膜回流。由于干燥后的捕捉抗體非常疏水，膠體金顆粒從吸收墊流向干燥后的捕捉抗體帶的可能性非常高。

化學(xué)試劑問題 

    封閉的生產(chǎn)環(huán)節(jié),  在干燥的狀態(tài)下這種封閉作用可能會(huì)讓膜具有更強(qiáng)的疏水性，因此甚至能在捕捉抗體帶引起更為普遍的背景染色或假陽性信號(hào)。采用過量的蛋白或活性劑進(jìn)行封閉的方式都能夠在樣品流動(dòng)過程中產(chǎn)生高粘性。 

    一些保護(hù)劑，不論在捕捉抗體中的、標(biāo)記抗體中的或者是樣品中的都能產(chǎn)生假陽性結(jié)果。硫柳汞（含硫和汞的化合物）和賴氨酸（一般pH<10.4下帶有大量的正電荷）在檢測(cè)中是特別要注意的問題。 

對(duì)假陽性結(jié)果診斷的補(bǔ)救措施 

    最明顯的原因首先是被注意到的，主要有金標(biāo)與捕捉抗體的反應(yīng)；特異性電荷吸引力、疏水作用力和金-硫結(jié)合力。然后應(yīng)當(dāng)注意在抗體、特殊樣品特性和跨膜流動(dòng)特性的非特異性交叉反應(yīng)。

1.是電荷的原因嗎？檢測(cè)體系pH值的變化（pH5~11）表明了正電荷是否存在和膠體金顆粒與捕捉抗體是否結(jié)合。 

2.是疏水作用力的原因嗎？這可能發(fā)生在固相中，捕捉抗體區(qū)或金標(biāo)區(qū)。改變體系中活性劑濃度對(duì)于疏水作用是否是主要因素可以提供頭緒 

3.是金-SH吸引的原因嗎？最有可能發(fā)生在捕捉抗體帶和樣品浸入帶中的半胱氨酸和精氨酸的基團(tuán)中。

對(duì)于假陽性問題解決的系統(tǒng)方法 

1. 產(chǎn)生的問題是與金標(biāo)液相關(guān)嗎？這個(gè)問題很好解決，換一種金標(biāo)液就可以了—舉例來說，在相同濃度和相同的pH值下用BSA-gold替換最初的金標(biāo)液。 如果問題還是沒有消除，那么最為可能的原因是所帶的電荷效應(yīng)。如果換了金標(biāo)液后不再產(chǎn)生假信號(hào)，那么問題產(chǎn)生的原因最可能是最初的金標(biāo)液的問題或者是標(biāo)記抗體的問題。在這里其他的對(duì)照是相似的金標(biāo)液和含有單克隆抗體和多克隆抗體的金標(biāo)液。

   下面是一個(gè)由于金標(biāo)液而產(chǎn)生的假陽性信號(hào)的例子。應(yīng)用的是針對(duì)于臨床樣品（血清）檢測(cè)傳染性疾病的檢測(cè)條。在所有的非陽性樣品中都看到了假陽性結(jié)果。當(dāng)使用BSA-gold金標(biāo)液后，假陽性信號(hào)消失了。而使用了另一種非特異性金標(biāo)液后，假陽性信號(hào)也消失了。然而，當(dāng)更換了非臨床對(duì)照樣品，PBS在pH7.2下，使用特異性金標(biāo)液假陽性信號(hào)仍然存在，在使用其它的金標(biāo)液則沒有假陽性信號(hào)。改變緩沖液的pH值為10后，減少了假陽性信號(hào)的發(fā)生，但是并沒有消除假陽性信號(hào)。因此我們可以得出結(jié)論，問題的產(chǎn)生與樣品或捕捉抗體無關(guān)，而是與對(duì)捕捉抗體一行的高靈敏度的金標(biāo)液有關(guān)。這些金標(biāo)很可能含有裸金顆粒，這可能與捕捉抗體發(fā)生結(jié)合。

2. 是捕捉抗體的原因嗎？在這種情況下使用的對(duì)照是相似的捕捉抗體或其它種類的抗體。然而在使用這些對(duì)照前，剝?nèi)SA捕捉蛋白可以說明是不是其它地方產(chǎn)生的問題。也有可能不是由于抗體本身而產(chǎn)生假陽性信號(hào)，而是由于在抗體中的一些保護(hù)劑的原因。在這種情況下，在適宜的緩沖液（例如10mmolPO）中進(jìn)行透析可以改善情況。如果用了其它的抗體假陽性信號(hào)消失了，那么顯而易見是特異性捕捉抗體引起了假陽性信號(hào)，采取的措施是更換抗體或者清除它。舉個(gè)例子，在實(shí)際操作中，兔的單克隆抗體有時(shí)會(huì)產(chǎn)生這種情況，這主要是由于疏水力的作用，需要采用特別的方法來處理。(Sg全血輔料) 

3. 是膜的問題嗎？任何檢測(cè)帶的開發(fā)中最重要的過程是選擇合適的膜。有些膜與其它的膜相比而言可能只適于特定類型的檢測(cè)或者只適合于特定的樣品。開發(fā)商應(yīng)當(dāng)有所有廠家的各種膜并且有各種孔徑的膜，這樣才能做出迅速的比較。舉例來說，在干燥的過程中膜的疏水性是顯而易見的，因此我們可以清楚的知道這批次的膜會(huì)產(chǎn)生隨機(jī)的假陽性信號(hào)。在選擇快速檢測(cè)技術(shù)所用的膜時(shí)不僅應(yīng)當(dāng)

4. 是化學(xué)藥品的原因嗎？在快速檢測(cè)帶的組裝過程中，金標(biāo)液和固相支持物（膜、結(jié)合墊或樣品墊）可能用化學(xué)試劑預(yù)先處理過。所加的化學(xué)試劑可以包括鹽、活性劑、蛋白質(zhì)、糖和聚合物。一些化學(xué)物質(zhì)能夠提高假陽性的幾率。 

考慮到所要求的流速和蛋白結(jié)合特性，而且要考慮到在制備過程中膜的均質(zhì)性。在這里需要用的對(duì)照是不同孔徑和不同來源的膜，還有就是同一批次的膜的不同區(qū)域。 

5. 是樣品的原因嗎？由于酸度、樣品污染等諸如此類的因素的變化，正如前所述，樣品能夠引起不可預(yù)知的假陽性信號(hào)。最簡(jiǎn)單調(diào)整的方式是改變樣品的酸度，這種方法可以很快確定是否是樣品中電荷吸引力的作用而產(chǎn)生的問題。也可能需要對(duì)樣品進(jìn)行過濾，過濾得步驟可以獨(dú)立于檢測(cè)程序，也可以作為檢測(cè)步驟的一部分而使用。

檢測(cè)中異常情況原因分析

對(duì)于個(gè)別情況導(dǎo)致的假陽性，可能為以下原因引起。例如：

     1、血液樣本為高血脂、高血紅蛋白、高度乳糜血等異常血樣，可能會(huì)引起非特異性吸附，以致出現(xiàn)細(xì)線或假陽。

     2、離心不夠徹底、樣本存放時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生一些細(xì)胞部分被破壞成細(xì)胞碎片，疏水的細(xì)菌碎片可能與捕捉抗體和金標(biāo)顆粒發(fā)生交叉反應(yīng)而導(dǎo)致假陽。

     3、操作方法　如果是直接加樣的情況，加樣量一定要足夠，否則易導(dǎo)致假陽；如果選擇將試劑條插入樣本的方式，則不能超過ＭＡＸ線，否則易導(dǎo)致假陽。

　  4、觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，導(dǎo)致金標(biāo)物質(zhì)的持續(xù)釋放，過量的抗原抗體造成假陽情況。